PUREfrex®2.0于2015年推出，相比1.0的版本PUREfrex®2.0的蛋白产量有所提升。PUREfrex®2.0改进了从大肠杆菌中纯化的所有组分的制备方法，并优化了因子的组成，实现了比PUREfrex 1.0高2-10倍的蛋白质生产率。
图2.PUREfrex® 1.0和PUREfrex® 2.0对比数据
PUREfrex®2.0使用方法：
以20ul反应体系为例，如果需要扩大体积可以等比例增加对应试剂。
1. 在室温或37℃下保温1分钟使溶液I完全融解，然后在冰上冷却。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 将溶液I，溶液II和溶液III 涡旋后简短离心收集管底内容物。
4. 根据下列表格配置反应液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
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Water |
7-X μL |
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Solution I |
10μL |
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Solution II |
1μL |
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Solution III |
1μL |
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Template DNA |
X μL |
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总体积 |
20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反应 2~4 h，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白。通过SDS-PAGE验证时，请用水稀释反应液后进行电泳。
试剂盒组分（各组分中具体成分信息保密）：
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组分名称 |
组分内容 |
保存温度 |
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Solution I |
Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. |
-20℃ |
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Solution II |
Proteins in 30 % glycerol buffer |
-20℃/-80℃ |
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Solution III |
Ribosome (20 μM) |
-80℃ |
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DHFR DNA |
PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) |
-20℃ |
请注意：1.在打开试剂盒之前请将试剂盒储存在-80°C的温度下。2.溶液II和溶液III避免反复冻融。
产品信息
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货号 |
名称 |
规格 |
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GFK-PF201-0.25-EX |
PUREfrex®2.0 |
1 x 250 µl |
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GFK-PF201-2ML-EX |
2ml |
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GFK-PF201-10ML-EX |
5 x 2 ml |
当您的蛋白质需要分子伴侣的帮助或形成二硫键以形成正确的构象时，只需向PUREfrex®2.0中添加补充试剂即可。
分子伴侣-帮助蛋白正确折叠，合成可溶形式蛋白质
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产品货号 |
产品名称 |
规格 |
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GFK-PF003-0.5-EX |
DnaK Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF003-10ML-EX |
DnaK Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF004-0.5-EX |
GroE Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF004-10ML-EX |
GroE Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
帮助形成二硫键的添加物
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产品货号 |
产品名称 |
规格 |
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GFK-PF005-0.5-EX |
DsbC Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF005-10ML-EX |
DsbC Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF006-0.5-EX |
PDI Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF006-10ML-EX |
PDI Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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